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  • 干貨分享—病理切片技術選擇與應用指南

    2025-10-16 病理切片技術全攻略:如何精準選擇石蠟、冰凍、速凍、塑封切片?在科研領域,組織切片技術是揭示生命微觀奧秘的核心工具。無論是基因表達定位、蛋白質互作研究,還是超微結構解析,切片質量直接影響實驗數據的可靠性。然而,面對石蠟切片、冰凍切片、速凍切片、塑封切片等多種技術,科研工作者常陷入選擇困境。本文從科研需求出發,解析四大切片技術的原理、適用場景及操作要點,助你輕松匹配實驗目標!一、技術原理與科研場景解析?石蠟切片:形態學研究的基石技術原理:組織經甲醛固定后,梯度脫水、透明化,石蠟包...
  • 關于菌株

    2025-10-13 1、問:斜面低溫保藏法答:將待保藏的菌種接種在合適的斜面培養基上,在相應的條件下培養至得到充足的菌體或者孢子,隨后密封試管置于4攝氏度左右保存,具體保存溫度按照保存菌種設定.保藏時間依微生物的種類從1個月到4個月不等.此法適用范圍廣(細菌、霉菌、放線菌、酵母均適用),操作簡便,成本低廉,復蘇方便,人員能隨時對微生物的狀態進行觀察.缺點是保藏時間較短,需要經常傳代處理,因連續傳代而容易引入基因突變或者雜菌,培養基的理化性質及微生物代謝產物等原因還會導致微生物性狀發生改變.因此斜...
  • 關于PCR,你知道多少?(四) ----幾種特殊的PCR

    2025-10-13 1、錨定PCR(anchoredPCR)通常采用的PCR反應必須知道欲擴增的DNA或RNA片段兩側的序列,而在大多數情況下對某些序列本身或其旁側序列并不清楚,“錨定PCR”可以幫助克服序列未知或序列未知帶來的障礙。基本做法是:分離細胞總RNA或者mRNA,在反轉錄酶的作用下合成cDNA,通過DNA末端轉移酶在cDNA3’末端加上poly(dG)尾巴。與此poly(dG)相對應的錨定引物poly(dC)為保證擴增特異性,建議此段旁聚(dC)在十二聚以上,5’端可帶上某些限制酶序...
  • 關于PCR,你知道多少?(三)----Taq DNA聚合酶

    2025-10-13 ----TaqDNA聚合酶在PCR反應中,毫無疑問的DNA聚合酶是最關鍵的因素。PCR最初使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段。但該酶存在很多缺陷,使之不能廣為應用,比如:熱穩定性差,每次DNA熱變性后大部分酶都被滅活,需要重新加入,每個循環都要重新加入;Klenow酶反應溫度較低,引物和模板容易形成非特異性配對,產生非特異性擴增。后來人們曾使用過T4DNA聚合酶和T7DNA聚合酶,兩者雖使擴增特異性增加,且使DNA合成速度提高了,但是由于其對熱的穩定...
  • 關于PCR,你知道多少?(二)

    2025-10-13 ----PCR反應引物設計PCR反應中引物起著很重要的作用。模板的不同、欲擴增的片段不同、需要的片段長度不同或者是用途不同等等,對引物的要求是不一樣的。PCR作為一種體外酶促反應,其效率和特異性主要取決于兩個方面,一是引物和模板結合的特異性,二是多聚酶對引物的有效延伸。引物設計的總原則就是提高擴增的效率和特異性。引物設計的原則一般遵循下列幾項:1、引物的長度以15~30bp為宜。引物過短會使特異性降低,過長則成本增加,而且也會降低特異性。常用的是18-27bp,但不應大于38...
  • 關于PCR,你知道多少?(一)

    2025-10-13 PCR的原理多聚酶鏈式反應(polymerasechainreaction)簡稱PCR技術,是近30多年發展起來的一種體外擴增特異性DNA片段的技術,可在數小時之內對僅有幾個拷貝的基因放大千萬倍。那么,PCR的原理是怎樣的呢?PCR技術實際上是在模板DNA、引物以及原料(四種脫氧核糖核苷酸)在適宜的反應條件下,通過DNA聚合酶的酶促反應完成DNA擴增的過程。PCR技術的特異性取決于引物和模板DNA結合的特異性。PCR反應分為三步:1)變性:通過加熱時DNA雙螺旋的氫鍵斷裂,雙...
  • 多聚-L-賴氨酸(Poly-L-Lysine)的原理、應用及配置

    2025-10-10 多聚賴氨酸一般常見的分子量有70,000~150,000,150,000~300,000和300,000,分子量越大,黏附力越強,但相對充分溶解較困難。原理:多聚賴氨酸溶液是廣泛應用的組織切片與玻片黏合劑,該多聚陽離子分子與組織切片上的陰離子相互作用會產生較強的黏合力。培養瓶表面的性質對于細胞培養至關重要,細胞表面的糖蛋白(陰性)易于吸附在親水性的表面上,因而細胞培養表面如果有相當含量的陽性電荷更能促進細胞吸附,這正是運用多聚賴氨酸優化細胞培養表面的重要所在。應用:適用組織學...
  • 儀器今天準不準?看心情?不,看TA!

    2025-09-30 嘿,實驗室的小伙伴們!是不是偶爾也會懷疑人生(哦不,是懷疑儀器)?明明步驟沒錯,結果卻飄忽不定……儀器今天的心情,是“精準模式”還是“隨緣模式”?別甩鍋儀器!90%的“不準”,都是沒做對“校準”——儀器就像精準的鐘表,用久了難免“走偏”:滲透儀養細胞、測體液的科研人,滲透儀非常重要,但這臺儀器用久了就會“記錯刻度”,導致檢測數據不準確。粘度計黏度計靠“液體流過毛細管的速度”計算結果,但管子里黏了殘留液、溫度變了點,速度就不準了。pH計pH計的電極老化、接觸空氣久了,就會把pH...
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